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    • 专利摘要:
    本發明提供一種醫藥組合物，用以抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α，經實驗證實，此醫藥組合物可有效抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)，此外，經過抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)可提高臨床上癌症的治療療效及治癒率。
    公开号:TW201306836A
    申请号:TW101127650
    申请日:2012-07-31
    公开日:2013-02-16
    发明作者:Shiaw-Der Yang
    申请人:Nat Univ Tsing Hua；
    IPC主号:A61K31-00
    专利说明:
    抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α之醫藥組合物及其應用
    本發明是關於一種醫藥組合物，特別是指一種可抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α之醫藥組合物。
    前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)是生物類黃酮(bioflavonoids)的一族，多酚類(polyphenolics)的一種；此物質廣泛存在於植物中，此物質較常存在於水果、堅果、種子、花、樹皮和蔬菜中，特別是在葡萄籽(Wilska,1996；Pekic et al.,1998；Yamakoshi et al.,1999；Bruno et al,2000；Yamakoshi,2002；Shao et al.,2003)和松樹皮萃取物中含量較高，近幾年來各種相關的研究皆顯示出類黃酮含有抗氧化成份，具有抗癌、抗過敏等的保護功能。OPC早期就開始被當成藥物使用，例如：Endotelon，治療微血管循環不良，除此之外還有增強免疫系統、增進循環系統，在國外，OPC常被廣泛的使用在高血壓的治療與心臟病的預防上，亦可用於治療血管疾病及減低因糖尿病所造成的視網膜病變(Motoaki et al.,1999)。此外，應用於美容用品方面也很多，能阻隔紫外線的傷害，並減少皮膚內膠原蛋白、彈性纖維被破壞，防止皮膚塌陷而出現皺紋，保護皮膚免於老化的傷害，進一步地達成皮膚抗老化的效果(Garbacki et al.,2002)。OPC最常應用在抗氧化方面，主要是抗過氧化和清除自由基，尤其是清除自由基有最顯著的效果，其他還有一些抑菌、抑制癌細胞增生和抗發炎等效果(Madhavin et al.,1998；Hassan et al.,2000；Wollgast et al.,2000)。
    OPC並非是單一化合物，是由一系列的化合物所組成，其中包括了大分子量和小分子量的化合物，小分子量的有：兒茶素(catechin和epicatechin)、二聚體(procyanidin B系列)、三聚體(procyanidin C系列)；大分子量為單寧(condensed tannins)和聚合物(polyhydroflavan-3-ol)，然而每個單體之間則是以碳-碳來鍵結的(Balde et al.,1995；de Bruyne et al.,1999；Bennie et al.,2000；Gabetta et al.,2000)。以葡萄籽萃取物為例，化學結構主要以flavan-3-ol為基本架構，其中最重要的成分就是OPC(Oligomer procyanidins)，OPC依聚合的等級(DP)可分為monomeric、oligomeric和polymeric proanthocyanidins，而且OPC的性質大部分與它的結構有關，特別是與聚合的等級有關(Haslam,1974；Robichaud et al.,1990；Rigaud et al.,1993；Hor et al.,1996；Baoshan et al.,1998；Le Roux et al.,1998)。OPC的基本單體(monomers)結構即為flavan-3-ol，稱為兒茶素(catechin)或另一立體結構異構物(epicatechin)，其本身不太具有活性(Poorter et al.,1986)；但結合成二聚體或三聚體時則具很高的生物活性，即為寡聚合體，又稱為OPC或Procyanidin(Foo et al.,1999)；兩個單體者稱二聚體dimers，三個為三聚體trimers，四個叫四聚體tetramers，以此類推，4個以上的單體所聚合而成的，稱為polymeric proanthocyanidins；然而，葡萄籽中的OPC大約由2~17個單體聚合成不同型態的化合物(Prieur et al.,1994)。
    脯胺酸導引蛋白激酶FA(PDPK FA)原先發現是一個蛋白質去磷酸化酵素的活化因子，命名為FA，其後證實為一多受質多功能的脯胺酸導引蛋白激酶。近年來，在免疫組織化學的研究發現脯胺酸導引蛋白激酶FA(PDPK FA)不只會在組織學上常見的腫瘤細胞中有高度的表現，也會在與異常表現PDPK FA的其他腫瘤相關細胞有關聯的訊息交互作用網絡(重新命名為致死系統)中異常堆積，像是上皮-間質轉換(EMT)或腫瘤-基質共演交流(TSCC)，所述其他腫瘤相關細胞，例如骨髓衍生細胞(BMDC)、癌症相關纖維母細胞(CAF)、循環腫瘤細胞(CTC)、循環腫瘤幹細胞(CTSC)、上皮腫瘤細胞(ETC)、上皮腫瘤幹細胞(ETSC)、癌症幹細胞(CSC)、腫瘤增殖細胞(TPC)、造血幹/源祖細胞(HSPC)、間質幹細胞(MSC)、間質腫瘤細胞(MTC)、間質腫瘤幹細胞(MTSC)或腫瘤浸潤巨噬細胞(TAM)，這些可用來偵測微小轉移。另外，若PDPK FA在骨髓衍生幹細胞(BMDSC；重新命名為致死細胞)中，可用來監控多種癌症病人疾病的狀態和治療的反應。不僅如此，PDPK FA/GSK-3α在骨髓細胞(BMC；重新命名為非健康骨髓細胞)中已被確立為一用來預測易染病體質的檢驗指標，從非常早期的傷口癒合、慢性發炎和免疫失調，到晚期的纖維化疾病和腫瘤形成；並且在未患有癌症的人類個體中，PDPK FA已被證實為疾病發展及惡化的過程中壓力及發炎反應的主要整合因子(惡性循環)。
    如本發明所使用，術語「非健康骨髓細胞」指一細胞中脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常表現，此細胞特別指的是骨髓細胞；而如本發明所使用，術語「致死細胞」指脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常堆積在一骨髓衍生幹細胞(BMDSC)；如本發明所使用，術語「致死系統」係指與標誌細胞中NFA異常表現有關聯的訊號交互作用網絡，較佳的是上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)或腫瘤-基質協同演化交流(tumor-stroma coevolutional communication,TSCC)；此外，如本發明所使用，術語「惡性循環(Vicious cycle)」指與脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積有關的壓力及/或發炎反應。
    然而，由於其激酶區域的序列同源性高，PDPK FA曾被認為是肝醣合成酶激酶3(GKS 3)的一個亞型，並改名為肝醣合成酶激酶3 α(GKS 3 α)，雖然GSK 3/GSK-3 β與NFA/GSK-3 α兩者在激酶結構域上結構相似且長期以來多被視為兩種密切相關之信號分子，然而當根據本發明中所證實之人類臨床研究時，這兩種信號分子之功能並非如先前在果蠅與齧齒動物中之研究所述，是相同的。此外，深入的研究及大多數的注意力都集中在GSK-3 β上，卻以GSK-3之名稱之，在許多領域的研究上對GSK-3並未有進一步詳盡之說明，且抑制GSK-3 β可能會導致腫瘤形成，所以如何治療糖尿病而不引發癌症，便成為一個重要的課題。綜合上述說明，PDPK FA所扮演獨特的角色在過去十多年來是被忽略的，而現行GKS-3抑制劑的發展是被限定於抑制GSK-3α/β的活性，而專一性針對PDPK FA/GSK-3α的抑制劑還未被製造出來，因此，發展出PDPK FA/GSK-3α的抑制劑藥物是刻不容緩的。
    本發明經由多項實驗成果證實，透過前花青素(OPC)，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α，此外，經過抑制PDPK FA/GSK-3α可提高臨床上癌症的治療療效及治癒率。
    有鑑於此，本發明目的為提供一抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)之醫藥組合物，上述醫藥組合物包含一有效劑量之前花青素(OPC)。
    較佳地，前述OPC係為萃取自葡萄、葡萄皮、葡萄籽、松樹皮、檸檬樹皮、花生內衣和莓果類、高梁、蘋果、可可豆、櫻桃、草莓、啤酒花、柳樹、肉桂、茶葉、漆樹、斑豆、紅腰豆、榛果和核桃。較佳地，前述醫藥組合物更包含一醫藥可接受之載劑，而該醫藥可接受之載劑係為賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、介面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、著色劑或香料。
    本發明之另一目的為提供一種用於治療一個體處於非健康狀態的醫藥組合物，系透過抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)的表現，其中該醫藥組合物係包含一有效劑量之前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)分子。
    較佳地，前述之非健康狀態為一未被診斷出患有癌症的人類具有一非健康骨髓細胞，其中非健康骨髓細胞為一脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積的一骨髓細胞，而該骨髓細胞係選自由幹/源祖細胞、骨髓衍生細胞、間質幹/源祖細胞、造血幹/源祖細胞、癌症幹細胞、纖維細胞、巨噬細胞、纖維母細胞、肌纖維母細胞、間質細胞和前述細胞類似物所組成的群組，其中該脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積的表現，系為在細胞質和/或核中脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)之蛋白、mRNA及DNA的表現。
    較佳地，上述非健康狀態為一未被診斷出患有癌症的人類具有一惡性循環(Vicious cycle)，其中該惡性循環(Vicious cycle)系為與脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常堆積相關的壓力及發炎反應。
    本發明之另一目的為提供一種用於治療癌症病患的醫藥組合物，系透過抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)的表現，其中該醫藥組合物係包含一有效劑量之前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)分子。
    較佳地，其中癌症病患具有一致死細胞，而致死細胞為一脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常堆積的一骨髓衍生幹細胞(BMDSC)。
    較佳地，其中癌症病患具有一致死系統，該致死系統為在一指標細胞(Marker cell)中脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常表現的一訊息相互作用網絡，而該訊號交互作用的細胞網絡系選自由上皮-間質轉換(epithelial-mesenchymal transition)及腫瘤-基質共演交流(tumor-stroma coevolutional communication)所組成之群組。其中上述指標細胞(Marker cell)係選自由骨髓衍生細胞(BMDC)，癌症相關纖維母細胞(CAF)，循環腫瘤細胞(CTC)，循環腫瘤幹細胞(CTSC)，上皮腫瘤細胞(ETC)，上皮腫瘤幹細胞(ETSC)，癌症幹細胞(CSC)，腫瘤增殖細胞(TPC)，造血幹/源祖細胞(HSPC)，間質幹細胞(MSC)，間質腫瘤細胞(MTC)，間質腫瘤幹細胞(MTSC)，腫瘤浸潤巨噬細胞(TAM)and髓樣細胞(myeloid cell)所組成之群組。
    較佳地，上述癌症包含膀胱癌、乳癌、腦癌、膽管癌、子宮癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎臟癌、血癌及淋巴癌。
    名詞定義
    除非有其他定義，所有在此所用的技術及科學詞彙，如同作為本發明所屬技術領域中具有一般技藝者一般性地了解具有相同意義。在此指稱的所有專利、申請案、公開申請案及其他應用，以及基因庫登錄號皆完整以參考文獻被整合起來。若本章節提出的定義與其他專利、申請案、公開申請案及其他在此引用的參考文獻所提出的定義相反或不一致，以本章節提出的定義為主。
    如本發明所使用，術語「PDPK FA/GSK-3α」指多受質/多功能的脯胺酸導引蛋白激酶FA，亦為已知的肝醣合成酶激酶3αWoodgett,EMBO J,1990,9：2431-2438；Yang,Curr Cancer Drug Targets,2004,4：591-596)。此蛋白的基因庫登錄號為AAD11986(SEQ ID NO.1)及AAH27984(SEQ ID NO.2)。
    如本發明所使用，術語「非健康骨髓細胞」指一細胞，其脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積，較佳的為骨髓細胞。
    如本發明所使用，術語「致死細胞」指一骨髓衍生幹細胞(BMDSC)其脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積的。
    如本發明所使用，術語「致死系統」指訊號交互作用的細胞網絡，較佳的是上皮-間質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)或腫瘤間質共演化交流(tumor-stroma coevolutional communication,TSCC)裡，其指標細胞內PDPK FA/GSK-3α的異常表現。
    如本發明所使用，術語「惡性循環(Vicious cycle)」指與脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積有關的壓力及/或發炎反應。
    如本發明所使用，術語「指標細胞(Marker cell)」指一細胞，該細胞可被細胞標誌標示出，包含但不限定於CD34、CD90、CD68、vimentin、FSP-1或αSMA。
    如本發明所使用，術語「非健康狀態」指一個體的「指標細胞」中，具有一非健康骨髓細胞或一惡性循環造成的病理生理臨床症狀。
    除非特別說明，對熟悉所屬技術領域、本發明所使用的實例、生化及臨床病理學技術的常用技術，所有在此使用的術語具有與一般技藝者的知識相同的意義。
    本發明所提出之「利用OPC，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α，達到預防癌症、易染病體質預防、預防轉移及惡性循環功效」將可由以下實施例說明而得到充分瞭解，使熟習本技藝之人士可以據以完成之，然而本發明之實施並非可由下列實施例而被限制期實施型態，熟習本技藝之人士仍可依揭露之實施例的精神推演出其他實施例，該等實施例街當屬於本發明之範圍。 實施例一、OPC抑制PDPK FA/GSK-3α之功效材料與方法一、抗PDPK FA/GSK-3α抗體的生產、鑑定及特徵
    對應於PDPK FA/GSK-3α胺基酸序列471-483的羧基終端區域的胜肽QSTDATPTLTNSS由胜肽合成儀合成(型號9050，Milligen，Bedford，馬里蘭州)。根據Reichlin(1980)描述的過程，為了便於將胜肽耦合到牛血清蛋白，利用戊二醛作為交互連接器，將半胱胺酸殘基加至NH 2端。經過親和管柱純化，並且產物可被PDPK FA/GSK-3α的胺基酸471-483的C端胜肽中和，實驗的結果均證明此抗PDPK FA/GSK-3α抗體具有免疫的專一性。 二、免疫組織化學分析
    以福馬林固定、石蠟包埋、含有最多腫瘤細胞之腫瘤的組織切片(5μm)於二甲苯中脫蠟，接著於濃度漸減的乙醇中水合。內生性過氧化酶以3%過氧化氫阻斷(blocking)，再以牛血清蛋白阻斷5分鐘。再將玻片培養於以0.05M Tris緩衝液(pH 7.4)稀釋的抗PDPK FA/GSK-3α抗體(2μg/mL)中於4℃作用16小時，再與超級增強劑(super enhancer，Super Sensitive TM Non-Biotin Detection System，BioGenex，San Ramon，CA)於室溫培養20分鐘，並以polymer-HRP(Super Sensitive TM)標幟物培養30分鐘。免疫染色法最後以DAB(3-3’diaminobenzidine tetrahydrochloride)呈色。在抑制酵素反應後，將玻片在室溫下培養於DS-enhancer(Zymed,San Francisco,CA)5分鐘，以防止兩種染色系統間的交互作用。之後，將玻片在室溫下培養於CD34、波形蛋白(vimentin)、CD68或α-SMA抗體中1小時。清洗後，將玻片在室溫下培養於抗小鼠鹼性磷酸酶30分鐘。使用BCIP/NBT溶液以顯現鍵結的抗體。以甲基綠溶液對比染色切片。 三、免疫細胞化學分析
    於室溫、700rpm下將平均1×10 6個細胞將細胞離心(Kubota 5200，日本)3分鐘，使細胞貼附在塗覆聚離胺酸的玻片上。染色前，細胞聚落(cytospots)以3.7%三聚甲醛固定15分鐘，並以0.2% Triton X-100處理90秒。內生性過氧酵素將被3%過氧化氫阻斷，再以胎牛蛋白阻斷10分鐘。將玻片培養於4℃、稀釋於0.05M Tris緩衝液(pH 7.4)的抗PDPK FA/GSK-3α抗體(2μg/mL)中16小時，再與超級增強劑(super enhancer，Super Sensitive TM Non-Biotin Detection System，BioGenex，San Ramon，CA)於室溫培養20分鐘，以及另以polymer-HRP(Super Sensitive TM)標幟物培養30分鐘。免疫染色最後以DAB(3,3’diaminobenzidine tetrahydrochloride)呈色。在抑制酵素反應後，將玻片於室溫下培養於DS-enhancer(Zymed,San Francisco,CA)5分鐘，以防止兩種染色系統間的交互作用。之後，將玻片在室溫下培養於CD34、vimentin、CD68或α-SMA抗體中1小時。清洗後，將玻片在室溫下培養於抗小鼠鹼性磷酸酶30分鐘。使用BCIP/NBT溶液以顯現鍵結的抗體。以甲基綠溶液對比染色玻片。 四、偵測不健康細胞/致死細胞的方法
    一種偵測受試者具有不健康細胞表現的方法，該方法包括由所述受試者獲得一生物樣本，測定在該樣本的細胞內PDPK FA/GSK-3α表現程度，其中在該受試者的細胞內PDPK FA/GSK-3α表現程度增加指示不健康細胞的存在。PDPK FA/GSK-3α的表現藉由分析PDPK FA/GSK-3α蛋白含量而進行測定，例如使用對PDPK FA/GSK-3α專一的抗體的免疫試驗法。該表現可藉由評估活性、蛋白質、RNA或DNA含量而測定。生物樣本可為骨髓、臍帶血、周邊血液、組織樣本、腹水、胸膜積水或體液。 結果
    偵測受試者具有不健康細胞表現，由受試者獲得一生物樣本，測定在該樣本的細胞內PDPK FA/GSK-3α表現程度，其中在該受試者的細胞內PDPK FA/GSK-3α表現程度增加表示具有不健康細胞的存在。
    為了在骨髓衍生細胞(BMDC)中證實PDPK FA/GSK-3α的全身性角色，對24位白血病病患的骨髓執行獨立的群組研究。在24例的群組研究中，14例為陰性，而10例被發現與PDPK FA/GSK-3α異常表現相關。CD34(BDPharmingen)，與第三類CD34抗原決定位專一性反應的581/CD34株，用以專一性的辨識人類造血幹/源祖細胞)的免疫表現型進一步顯示：相對於陰性病例(圖一(A))，一小族群的CD34+造血幹/源祖細胞及CD34-間質幹/源祖細胞(Moioli et al,PLoS ONE,2008,3：e3922)的PDPK FA/GSK-3α極強度表現(>3+)及其有PDPK FA/GSK-3α的中度至高度表現(2+至3+)的衍生物(圖一(B))常可在具有惡化性疾病的病患的骨髓中偵測得到。
    CD34、CD68、vimentin及α-平滑肌蛋白(α-SMA)的免疫表現型分析進一步顯示即使在手術切除後，較差預後第I期腫瘤基質中有一小族群PDPK FA/GSK-3α極高度表現(>3+)的CD34+/vimentin造血幹/源祖細胞、CD34+/vimentin+纖維球及CD34-/vimentin+間質幹/源祖細胞(Bucala,Fibrocytes,World Scientific Pub Co Inc,2007：1-18；Moioli et al,PLoS ONE,2008,3：e3922)(圖二(A)及(C))如範例I所述，伴隨著相對較大族群PDPK FA/GSK-3α中度至高度表現(2+至3+)的CD68+巨噬細胞(圖二(E))、vimentin+纖維母細胞及間質細胞(圖二(C))及α-SMA+肌纖維母細胞(圖二(G))。相反的是，有良好結果的病例則呈現PDPK FA/GSK-3α陰性反應(請參閱圖二(B)、(D)、(F)、(H))。
    又PDPK FA/GSK-3α高度表現在似CD34+纖維球可在來自3個不同家庭的3個不斷反覆發炎的孩童周邊血液中全部偵測到(圖三A、B)，這種不健康的BMDC也可在罹患川崎氏症候群(特性為免疫系統失調)的系統性不健康幼兒的臍帶血中被偵測(圖四)。
    在1948例腫瘤的群組研究中(含各期的膀胱癌、乳腺癌，腦癌，膽管癌，子宮頸癌，結直腸癌，子宮內膜癌，食道癌，胃癌，肝癌，肺癌，鼻咽癌，口腔癌，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，腎臟癌、白血病和淋巴瘤)，1098例為陰性，而850例為與PDPK FA/GSK-3α異常表現相關(圖五)。在367例第I期腫瘤的群組研究中(含膀胱癌、乳腺癌，腦癌，膽管癌，子宮頸癌，結直腸癌，子宮內膜癌，食道癌，胃癌，肝癌，肺癌，鼻咽癌，口腔癌，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，腎臟癌、白血病和淋巴瘤)，240例為陰性，而127例為與PDPK FA/GSK-3α異常表現相關。若病人腫瘤基質內有此訊號分子異常表現，則此等病人容易有較差的癒後(圖六)。
    利用免疫染色法，分析病人在使用OPC前後，分析PDPK FA/GSK-3α表現情況，實驗結果發現，在急性白血病(圖七(A)使用前、圖七(B)使用後)、淋巴癌(圖八(A)使用前、圖八(B)使用後)、腎癌(圖九(A)使用前、圖九(B)使用後)、子宮惡性肉瘤(圖十(A)使用前、圖十(B)使用後)及來自癌症家族全身性不健康孩童(圖十一(A)使用前、圖十一(B)使用後)中可發現到，病人在未使用OPC前，病人的檢體中PDPK FA/GSK-3α呈現陽性表現(紅棕色)，在病人使用OPC後，病人的檢體中並無PDPK FA/GSK-3α的陽性表現。
    綜上所述，本發明已確立OPC，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α，達到預防癌症功效。
    圖一A描述骨髓衍生細胞(BMDC)中PDPK FA/GSK-3α的陰性表現。
    圖一B描述骨髓衍生細胞(BMDC)中PDPK FA/GSK-3α的陽性表現
    圖二A描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以CD34共同染色的陽性型態。
    圖二B描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以CD34共同染色的陰性型態。
    圖二C描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以vimentin共同染色的陽性型態。
    圖二D描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以vimentin共同染色的陰性型態。
    圖二E描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以CD68共同染色的陽性型態。
    圖二F描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以CD68共同染色的陰性型態。
    圖二G描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以α-SMA共同染色的陽性型態。
    圖二H描述在第I期腫瘤基質中PDPK FA/GSK-3α顯示的異常表現型態，以α-SMA共同染色的陰性型態。
    圖三A來自癌症家族或罹患重複發炎循環的孩童周邊血液中，與PDPK FA/GSK-3α高度表現的CD34+類纖維球的共同免疫細胞化學染色成陽性型態。
    圖三B來自癌症家族或罹患重複發炎循環的孩童周邊血液中，與PDPK FA/GSK-3α高度表現的CD34+類纖維球的共同免疫細胞化學染色成陰性型態。
    圖四在罹患川崎症候群的免疫系統疾病特徵的全身性不健康孩童的臍帶血中，與PDPK FA/GSK-3α高度表現相關的CD34+造血幹/源祖細胞的共同免疫細胞化學染色。
    圖五各種腫瘤病患的之Kaplan-Meier不發病存活曲線
    圖六具有極早期第I期腫瘤的各種病患之Kaplan-Meier不發病存活曲線。
    圖七A為急性白血病病人使用OPC前，PDPK FA/GSK-3α表現型態。
    圖七B證實急性白血病病人使用OPC後，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α表現。
    圖八A為淋巴癌病人使用OPC前，PDPK FA/GSK-3α表現型態。
    圖八B證實淋巴癌病人使用OPC後，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α表現。
    圖九A為腎癌病人使用OPC前，PDPK FA/GSK-3α表現型態。
    圖九B證實腎癌病人使用OPC後，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α表現。
    圖十A為子宮惡性肉瘤病人使用OPC前，PDPK FA/GSK-3α表現型態
    圖十B證實子宮惡性肉瘤病人使用OPC後，可有效抑制PDPK FA/GSK-3α表現。
    圖十一A為來自癌症家族全身性不健康孩童病人使用OPC前，周邊血PDPK FA/GSK-3α表現型態
    圖十一B證實來自癌症家族全身性不健康孩童病人使用OPC後，可有效抑制周邊血PDPK FA/GSK-3α表現。
    权利要求:
    Claims (19)
    [1] 一種用於抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)之醫藥組合物，該醫藥組合物包含前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)分子。
    [2] 如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，其中該前花青素係萃取自葡萄、葡萄皮、葡萄籽、松樹皮、檸檬樹皮、花生內衣、莓果類、高梁、蘋果、可可豆、櫻桃、草莓、啤酒花、柳樹、肉桂、茶葉、漆樹、斑豆、紅腰豆、榛果和核桃。
    [3] 如申請專利範圍第1項所述之醫藥組合物，該醫藥組合物更包含一醫藥可接受之載劑。
    [4] 如申請專利範圍第3項所述之醫藥組合物，其中該醫藥可接受之載劑係為賦形劑、稀釋劑、增稠劑、填充劑、結合劑、崩解劑、潤滑劑、油脂或非油脂的基劑、介面活性劑、懸浮劑、膠凝劑、輔助劑、防腐劑、抗氧化劑、穩定劑、著色劑或香料。
    [5] 一種用於治療一個體處於非健康狀態的醫藥組合物，系透過抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)的表現，其中該醫藥組合物係包含一有效劑量之前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)分子。
    [6] 如申請專利範圍第5項所述之醫藥組合物，其中該非健康狀態為一未被診斷出患有癌症的人類具有一非健康骨髓細胞。
    [7] 如申請專利範圍第4項所述之醫藥組合物，其中該非健康狀態為一未被診斷出患有癌症的人類具有一惡性循環(Vicious cycle)。
    [8] 如申請專利範圍第6項所述之醫藥組合物，其中該非健康骨髓細胞為一骨髓細胞其脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積。
    [9] 如申請專利範圍第8項所述之醫藥組合物，其中該骨髓細胞係選自由幹/源祖細胞、骨髓衍生細胞、間質幹/源祖細胞、造血幹/源祖細胞、癌症幹細胞、纖維細胞、巨噬細胞、纖維母細胞、肌纖維母細胞、間質細胞和前述細胞類似物所組成的群組。
    [10] 如申請專利範圍第8項所述之醫藥組合物，其中該脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積的表現，系為在細胞質和/或核中脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)之蛋白、mRNA及DNA的表現。
    [11] 如申請專利範圍第7項所述之醫藥組合物，其中該惡性循環(Vicious cycle)系為與脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積有關的壓力及/或發炎反應。
    [12] 一種用於治療癌症病患的醫藥組合物，系透過抑制脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)的表現，其中該醫藥組合物係包含一有效劑量之前花青素(Oligomer procyanidins，OPC)分子。
    [13] 如申請專利範圍第12項所述之醫藥組合物，其中癌症病患具有一致死細胞。
    [14] 如申請專利範圍第12項所述之醫藥組合物，其中癌症病患具有一致死系統。
    [15] 如申請專利範圍第13項所述之醫藥組合物，其中致死細胞為一骨髓衍生幹細胞(BMDSC)其脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)在細胞內異常堆積。
    [16] 如申請專利範圍第14項所述之醫藥組合物，其中該致死系統為在一指標細胞(Marker cell)中脯胺酸導引蛋白激酶FA/肝醣合成酶激酶3α(PDPK FA/GSK-3α)異常表現的一訊號交互作用的細胞網絡。
    [17] 如申請專利範圍第16項所述之醫藥組合物，其中該訊息交互作用的細胞網絡系選自由上皮-間質轉換(epithelial-mesenchymal transition)及腫瘤-基質共演交流(tumor-stroma coevolutional communication)所組成之群組。
    [18] 如申請專利範圍第16項所述之醫藥組合物，其中該指標細胞(Marker cell)係選自由骨髓衍生細胞(BMDC)，癌症相關纖維母細胞(CAF)，循環腫瘤細胞(CTC)，循環腫瘤幹細胞(CTSC)，上皮腫瘤細胞(ETC)，上皮腫瘤幹細胞(ETSC)，癌症幹細胞(CSC)，腫瘤增殖細胞(TPC)，造血幹/源祖細胞(HSPC)，間質幹細胞(MSC)，間質腫瘤細胞(MTC)，間質腫瘤幹細胞(MTSC)，腫瘤浸潤巨噬細胞(TAM)和髓樣細胞(myeloid cell)所組成之群組。
    [19] 如申請專利範圍第12項所述之醫藥組合物，其中癌症包含膀胱癌、乳癌、腦癌、膽管癌、子宮癌、食道癌、胃癌、肝癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、胰臟癌、前列腺癌、腎臟癌、血癌及淋巴癌。
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    同族专利:
    公开号 | 公开日
    US20130035379A1|2013-02-07|
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    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    US20100151457A1|2008-12-17|2010-06-17|National Tsing Hua University|Detection of Unhealthy Cell and Uses Thereof|CN110161029A|2019-06-24|2019-08-23|南京林业大学|一种薄壳山核桃染色体核型分析方法|
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